全基因合成流程進度說明

從接受到您的訂單開始，基因合成共分為六個主要步驟。在中間最主要的步驟04基因組裝中，又分成了連接轉化、克隆篩選、測序驗證和突變修複四個子流程。同時，又由於組裝片段長度和載體的不同，分成了分片段組裝、全長片段組裝和客供載體組裝三個組裝類型。3 Kb以內的基因合成，不需要分片段組裝，可以直接進行全長片段組裝。pUC係列載體作為基因合成的標準載體可免費提供。而客戶提供的指定載體，還需要額外的客供載體組裝這個步驟。更詳細的內容可通過下方流程圖及流程說明表來得到明確釋意。

圖1：基因合成流程圖

表1：基因合成流程說明表

基礎		適用類型				流程說明
		pUC 57 載體		客供載體
		長度 ≤3 Kb	長度＞3Kb	長度≤3 Kb	長度＞3 Kb
01 方案設計		√	√	√	√	您的序列將進行進一步的分析，包括根據最終應用來確定優化方案，GC含量、高度重複序列、複雜二級結構、更長的片段長度等會給基因合成帶來更高的難度。此期間我們會實時與您保持溝通並確認最佳實驗方案。對於非常大的基因，通常要先拆分成 500~1000 bp的分片段，分別合成，然後再進行組裝。引物的設計是進入生產前的重要步驟
02 引物合成		√	√	√	√	使用Oligo化學合成的方式，合成帶有重疊區域的 40~200 nt的小片段引物
03 寡核苷酸拚接		√	√	√	√	使用重疊PCR的技術，將單鏈的引物拚裝成雙鏈的基因片段，對於3 Kb以內的且無複雜二級結構的基因，可直接進入第4步全長組裝；如果您的基因全長超過 3 Kb，則需要進行分片段組裝
04 基因組裝	04-1 分片段組裝		√		√	大於3 Kb的基因，需要先分成多個分片段並插入多個 pUC係列載體，經過連接轉化、克隆篩選和測序驗證和突變修複，直到得到完全正確序的重組載體
	04-2 全長片段組裝	√	√	√	√	通過無縫克隆或酶切等組裝技術，進一步將分片段拚接成全長後插入pUC係列載體，經過連接轉化、克隆篩選和測序驗證和突變修複，直到得到完全正確序的重組載體
	04-3 客供載體組裝			√	√	通過無縫克隆或酶切等組裝技術，進一步將分片段拚接成全長後插入客戶提供或指定的載體，經過連接轉化、克隆篩選和測序驗證和突變修複，直到得到完全正確序的重組載體
05 成品質檢		√	√	√	√	通過測序驗證、酶切電泳等方式對成品進行最終質量檢測
06 等待發貨		√	√	√	√	您需要的貨品通過抽幹、分裝和包裝，已經在等待發貨了
00 取消訂單						由於多種不可控因素，即便是多次嚐試和努力，基因合成仍存在一定程度的失敗概率，在和您協商一致的前提下，我們會選擇主動放棄嚐試並取消訂單。