熒光定量PCR

服務簡介

熒光定量PCR 技術，是通過在PCR 反應體係中加入熒光基團，利用熒光信號的變化實時監測PCR 擴增反應中每一個循環擴增產物量的變化，對起始模板進行定量分析的方法。實驗采用兩種定量方式，即絕對定量和相對定量。熒光定量PCR 可用於mRNA 表達量水平檢測、MicroRNA 表達量水平檢測和基因拷貝數檢測。實驗的方法可分為SYBR Green I 法和TaqMan 探針法。實時熒光PCR技術已廣泛應用於臨床及生命科學研究的各個領域中。在科研方麵可定量分析各種基因的表達分析，基因突變和多態性分析，單核苷酸多態SNP測定及易位基因的檢測;在醫療方麵可用於免疫組化分析、臨床疾病早期診斷、病原體檢測、耐藥性分析、腫瘤微小殘留病變研究等。

熒光定量PCR常用術語：

--基線:實時熒光定量PCR反應的基線是指在PCR開始的幾個循環中(-般為3-15個循環) 的信號水平。此階段的熒光信號變化量極小。低水平的基線信號相當於反應的背景或噪聲。每個實時熒光定量PCR反應的基線應通過用戶分析或擴增曲線自動分析，根據經驗確定。基線的設置，會影響到熒光閾值及Ct值。

--熒光閾值:熒光閾值是在熒光擴增曲線上人為設定的一個值，它可以設定在熒光信號指數擴增階段任意位置上，一般熒光閾值默認是PCR 3-15個循環熒光信號標準偏差的10倍。

--Ct值:Ct值指的是PCR擴增過程中擴增產物的熒光信號達到設定的閾值時所經過的循環數。

--標準曲線:標準曲線是標準物質的物理/化學屬性跟儀器響應之間的函數關係。對已知拷貝數的標準樣品做係列稀釋，對不同稀釋度的標準樣品進行熒光定量PCR並記錄Ct值，根據Ct值及拷貝數的對數繪製得到標準曲線，標準曲線的縱坐標代表起始拷貝數的對數，橫坐標代Ct值。