常規PCR（產物帶dA粘性末端）

酶+buffer分開包裝

B500010 Taq DNA 聚合酶

預混液2×mix

性價比高、暢銷

B532061 2X SanTaq PCR Mix 預混液，含藍染料

進口原料、高品質

B532071 SanTaq Plus PCR Mix 預混液，不含染料

B532081 SanTaq Plus PCR Mix 預混液，含藍染料

高保真PCR（產物為平末端）

酶+buffer分開包裝

B500014 Pfu DNA 聚合酶

預混液2×mix

常規pfu mix

B532083 SanPfu PCR Mix 預混液，含藍染料

B532073 SanPfu PCR Mix 預混液，不含染料

特殊高保真酶，擴增片段長、效率高

B639292 2×高保真PCR Mix預混液

特殊類型PCR

熱啟動PCR

B500015 熱啟動 DNA 聚合酶（酶+buffer分開包裝）

B639288 2×熱啟動PCR預混液（不含染料）

擴增長片段

B639285 長片段 PCR 擴增試劑盒

快速PCR

B532062 2X SanTaq Fast PCR Mix 預混液，含藍染料

直接擴增樣品

B639289 直接 PCR 擴增試劑盒

高GC含量模板

B639283 高GC PCR擴增試劑盒

B532511 高GC含量模板PCR擴增試劑盒

多重PCR

B639287 2×多重PCR擴增試劑盒

等溫擴增

B532455 Lamp等溫擴增PCR混合液（通用型）

B639261 全基因組DNA擴增試劑盒（WGA擴增）

逆轉錄PCR RT-PCR

B110025 Abstart一步法RT-PCR預混液

逆轉錄試劑盒

長鏈RNA

B532435 M-MuLV第一鏈cDNA合成試劑盒 （適合獲得長鏈cDNA）

B532445 AMV 第一鏈cDNA 合成試劑盒 （更適用高GC%RNA）

miRNA

B532451 miRNA 第一鏈 cDNA 合成（加尾法，適合大量miRNA的統一逆轉錄）

B532453 miRNA 第一鏈 cDNA 合成（莖環法，適合少量miRNA的特異逆轉錄）

qPCR mix

染料法

SYBR Green不飽和染料

無ROX染料 B639271 2xSG Fast qPCR Master Mix

適用於Rotor-Gene™, DNA Engine Opticon™, Opticon™ 2, Chromo 4™ Real-Time Detector, Mastercycler® ep realplex, Smart Cycler®, Roche LightCycler® 480, Roche LightCycler® Nano, Bio-Rad CFX96, and Illumina Eco™ Corbett Rotor-gene 3000,6000, Eppendorf Realplex 2

低ROX染料 B639272 2xSG Fast qPCR Master Mix（Low Rox）

適用於Applied Biosystems 7500, Applied Biosystems 7500 Fast, Stratagene Mx3000P®, Stratagene Mx3005P™, Stratagene Mx4000™, Applied Biosystems ViiA 7 and Applied Biosystems QuantStudio™ 12K Flex，QuantStudio3，QuantStudio5.

高ROX染料 B639273 2xSG Fast qPCR Master Mix（High Rox）

適用於Applied Biosystems 5700, Applied Biosystems 7000, Applied Biosystems 7300, Applied Biosystems 7700, Applied Biosystems 7900, Applied Biosystems 7900HT, Applied Biosystems 7900 HT Fast, Applied Biosystems StepOne™ and Applied Biosystems StepOnePlus™.

更適用於miRNA B532461 miRNA熒光定量PCR試劑盒(染料法)

包含單獨的LOW/HIGH ROX,適合所有機型，靈敏度高

逆轉錄與qPCR一步進行 B639277 一步法反轉錄熒光定量試劑盒

Eva Green飽和染料

高ROX染料 B630001 Green-2-Go 2X qPCR-ROX 預混液

適用於ABI® 7000, 7300, 7700, 7900; StepOnePlus™StepOne; Eppendorf® Realplex 4

低ROX染料 B630002 Green-2-Go 2X qPCR-Low-ROX 預混液

適用於ABI®7500; Stratagene®Mx3000, Mx3005, Mx4000

無ROX染料 B630003 Green-2-Go 2X qPCR-iCycler 預混液

適用於BioRad® iCycler®, iQ™5, MyiQ

無ROX染料 B630004 Green-2-Go 2X qPCR-S 預混液

適用於BioRad® CFX96; Roche LightCycler® 480, MJ ResearchOpticon™ and Opticon™ 2; MJ research Chromo® 4;Corbett Rotor-grene® 600, 3000; Eppendorf® Realplex 2

探針法

單重qPCR檢測：

無ROX參比染料 B639274 2xTaqMan Fast qPCR Master Mix

適用於Rotor-Gene™, DNA Engine Opticon™, Opticon™ 2, Chromo 4™ Real-Time Detector, Mastercycler® ep realplex, Smart Cycler®, Roche LightCycler® 480, Roche LightCycler® Nano, Bio-Rad CFX96, and Illumina Eco™ Corbett Rotor-gene 3000,6000, Eppendorf Realplex 2

低ROX參比染料 B639275 2xTaqMan Fast qPCR Master Mix(Low Rox)

適用於Applied Biosystems 7500, Applied Biosystems 7500 Fast, Stratagene Mx3000P®, Stratagene Mx3005P™, Stratagene Mx4000™, Applied Biosystems ViiA 7 and Applied Biosystems QuantStudio™ 12K Flex，QuantStudio3，QuantStudio5.

高ROX參比染料 B639276 2xTaqMan Fast qPCR Master Mix(High Rox)

適用於Applied Biosystems 5700, Applied Biosystems 7000, Applied Biosystems 7300, Applied Biosystems 7700, Applied Biosystems 7900, Applied Biosystems 7900HT, Applied Biosystems 7900 HT Fast, Applied Biosystems StepOne™ and Applied Biosystems StepOnePlus™.

多重qPCR檢測：

B630005 TaqProbe qPCR Multiplex Mastermix

適用於ABI®7000, 7300, 7500, 7700, 7900; StepOne Plus™ StepOne™; BioRad®iCycler®, iQ™5, CFX96, Opticon™2, Chromo®4; Corbett Rotor-gene®6000,3000; Stratagene®Mx3000, Mx4000; Roche LightCycler®2.0, 480

Q：PCR酶組分分開包裝與mix預混液的區別？

A：分開包裝是指酶、Buffer與MgCl₂分為獨立三管，有時候為了提升PCR的效率或增加擴增的特異性，會對反應體係中的Mg²⁺濃度進行調節，此時使用獨立包裝的產品會更加方便合適，而對於常規的PCR擴增，並不需要對反應體係進行調節，使用2×Mix會更加方便、快捷。

Q：Taq酶與Pfu酶的區別：

A：Taq酶是從水生棲熱菌Thermus Aquaticus中分離出的具有熱穩定性的DNA聚合酶，其特點為：擴增效率高，擴增速度約為1 kb/min，產物帶有dA粘性末端，可以連接T載體，因此適用於常規PCR檢測及短片段擴增克隆。其缺點是：缺乏保真性，擴增長片段時易產生錯配。

Pfu酶是在嗜熱的古核生物火球菌屬內發現的具有熱穩定性的DNA聚合酶。其特點為：具有保真性，3-5的核酸外切酶活性能夠將錯配堿基切除並矯正，產物為平末端，可以連接平末端載體。其缺點是：擴增效率低，擴增速度較慢，約為600 bp/min，對長片段擴增成功率低。

如需要高保真擴增長片段，推薦使用B639292 高保真PCR mix預混液，其酶為特殊的高保真酶，兼顧了Taq酶的高擴增效率以及Pfu的高保真性。

Q：什麼是熱啟動PCR酶？

A：常規的PCR酶雖然最適酶活溫度為72°C，但是其在低溫時仍會保持較高的延伸活性，此時在較低的溫度下引物可能與部分單鏈模板形成非特異性結合，並在PCR酶的作用下延伸。結果會導致非目標序列的擴增，影響反應的特異性。熱啟動PCR酶是指經過抗體、適配體或化學修飾的DNA聚合酶，這種修飾使得反應最初時PCR酶失去功能，在經過高溫活化修飾脫離之後才回複活性，熱啟動可減少非靶序列的擴增，提高反應的特異性。

Q：可以不提取核酸，直接用樣本進行PCR嗎？

A：看情況而定，如果為簡單樣本，例如細菌菌液、單克隆等，是可以使用菌液或者挑取單克隆直接作為模板進行擴增的。但對於複雜樣本，比如部分陽性菌、真菌酵母、動植物組織、環境樣本等，其細胞壁難以破碎或成分中有很多PCR抑製物，直接PCR成功率很低，所以推薦提取核酸進行擴增，或者嚐試使用B639289 直接PCR擴增試劑盒，該試劑盒能夠耐受諸多PCR抑製物，可直接從動物組織、植物組織、血液、細胞、人的頭發和口腔拭子擴增DNA。

Q：如何提升高GC含量模板的PCR成功率？

A：高GC含量模板經常出現擴增失敗，主要原因在於：一方麵引物可能也是高GC含量，容易產生嚴重的非特異性擴增，另一方麵高GC含量的模板退火時容易形成高級結構，如發夾莖環等，PCR酶延伸至高級結構處受阻易導致擴增失敗。針對以上問題，可以嚐試以下幾種解決方法：1. 使用PCR添加劑，如DMSO等；2. 采用Touch Down PCR流程，增加引物退火的正確性，3. 調節反應體係，如降低Mg²⁺濃度、引物濃度等。或者直接使用高GC PCR擴增試劑盒（B639283）。

Q：MuLV和AMV逆轉錄酶在合成第一鏈cDNA方麵有什麼區別？

A：MuLV來自鼠白血病逆轉錄酶，其最適溫度為37°C，在更高溫度下，MuLV不穩定，但MuLV可合成更長的產物。AMV來自禽成纖維病毒逆轉錄酶，AMV的熱穩定性能更好，對次級結構耐受。用AMV的延伸溫度可達55°C, 以消除次級結構，但在這樣溫度下，引物延伸反應的得率通常降低。另外，AMV具有RNA 酶H活性，能對DNA:RNA雜交體的RNA部分進行內切降解。因此，若逆轉錄比較長的片段，推薦使用MuLV，而進行一般的逆轉錄或RNA中的GC含量較高時，推薦使用AMV。

Q：miRNA為什麼要用特殊的逆轉錄方法，加尾法和莖環法的原理和區別在哪裏？

A：miRNA與mRNA不同，成熟的miRNA的長度隻有20nt左右，非常短，使用常規的逆轉錄方法無法對其進行有效逆轉錄，也無法對其進行PCR，因此必須通過特殊方法進行逆轉錄，目前主流的miRNA逆轉錄方法分為加尾法還是莖環法，它們詳細的逆轉錄原理及特點可以參見資料：加尾法莖環法

Q：染料法熒光定量PCR中的染料是什麼？

A：染料法熒光定量PCR中的染料是核酸嵌合染料，它們的特性是在結合核酸的情況下，通過激發能夠發出特定波長的熒光，而不結合核酸的幾乎不發光，因此可以用此類染料對PCR產物的量進行實時監控。常用的染料為SYBR Green I、LC Green、Eva Green等。

Q：飽和染料與不飽和染料的區別在哪裏？

A：某些嵌合染料，如SYBR Green I，當其濃度過高時，會對PCR產生明顯的抑製作用，在配製qPCR體係中，該染料濃度較低，染料不能完全占據DNA產物雙鏈上的所有的位置，因此稱為“不飽和染料”。而另外一些嵌合染料如Eva Green等，高濃度時也不會對PCR產生抑製，在配製qPCR體係中，這種染料濃度很高，染料可以完全占據DNA產物雙鏈上的所有的位置，因此稱為“飽和染料”。

在應用方麵，常規的熒光定量PCR使用不飽和染料即可達到要求，但是對於某些精細的分型實驗如高分辨率熔解曲線（HRM），隻有使用飽和染料，才能確保精確檢測產物的解鏈情況。

Q：ROX參比染料的作用是什麼？

A：在某些熒光定量平台上（如ABI、Agilent等），可以通過特殊手段，對反應管中液體量差異或者由於泡沫/蒸發導致的熒光值偏差進行校正，這種手段就是添加ROX參比染料。ROX一般預混在qPCR Mix中，但是其不參與PCR反應，當反應液體量添加不一致或PCR過程中產生蒸發時，會導致該管中的目的基因熒光值產生變化，相應的，ROX熒光也會產生變化，從而儀器能夠根據ROX的熒光值變化對目的基因的熒光值進行校正。

當然，在良好操作的前提下，不使用ROX也是可以得到很標準的結果的，所以即使在ABI、Agilent等支持ROX校正的qPCR平台，也可以不適用ROX校正，在儀器設置界麵，將ROX校正勾選掉即可。

Q: qPCR mix都適用於哪些儀器？

不同的qPCR mix適用儀器表如下，要注意，適用機型中隻列舉了常用的型號，若您的儀器型號不在此表中，可以聯係技術支持為您推薦合適的qPCR mix。